Bột M199 Medium

M199 đặc biệt thích hợp cho nuôi cấy tế bào không biến đổi và cũng thường được sử dụng trong virus học, sản xuất vắc-xin và nuôi cấy in vitro các mẫu cấy chính của tế bào biểu mô tuyến tụy chuột và mô thấu kính chuột. So với các môi trường cơ bản khác, M199 chứa các thành phần độc đáo, bao gồm adenine, adenosine, hypoxanthine, thymine và các vitamin khác. M199 có hai thành phần muối cân bằng, thành phần muối Earle thường được sử dụng trong môi trường CO2, thành phần muối Hank được sử dụng trong môi trường không có CO2. Môi trường 199 không chứa protein, lipid hoặc các yếu tố tăng trưởng. Môi trường 199 sử dụng hệ thống đệm natri bicarbonate (2.2 g/L) và do đó cần môi trường CO5 10–2% để duy trì độ pH sinh lý. Đối với nhiều ứng dụng nuôi cấy tế bào, chúng tôi cung cấp môi trường M199 đã được biến đổi với nhiều thành phần khác nhau, cũng như môi trường M199 với các thành phần có thể tùy chỉnh.

Thành phần của M199 Medium dạng bột

Môi trường nuôi cấy tế bào dạng bột khô M199 này cần được bổ sung natri bicarbonate, điều chỉnh độ pH và lọc trong quá trình chuẩn bị. Sơ đồ chuẩn bị chi tiết như sau:

1. Thêm 950 mL nước cất vào bình trộn càng gần với thể tích cuối cùng càng tốt.
2. Thêm môi trường khô vào nước ở nhiệt độ phòng (15°C đến 30°C) và khuấy nhẹ. Không đun nóng nước.
3. Rửa sạch bên trong gói để loại bỏ hết bột còn sót lại.
4. Thêm 29.3 mL dung dịch NaHCO75 3 g/L vào môi trường.
5. Điều chỉnh pH xuống thấp hơn 0.2 đến 0.3 đơn vị so với pH làm việc cuối cùng mong muốn bằng cách từ từ thêm và khuấy NaOH 1 N hoặc HCl 1 N. Độ pH có thể tăng từ 0.1 đến 0.3 đơn vị sau khi lọc. Độ pH làm việc được khuyến nghị là 7.1-7.4.
6. Điều chỉnh thể tích cuối cùng bằng nước cất.
7. Xử lý ngay môi trường thông qua chức năng lọc màng của bộ lọc 0.2 μm vào một thùng chứa vô trùng bằng hệ thống áp suất dương.