Môi trường nuôi cấy MEM (Môi trường tối thiểu cần thiết)

MEM Culture Medium (Minimum Essential Medium) còn được gọi là Minimum Essential Medium, Minimum basic Medium hoặc Low limited Eagle Medium. Nó được Harry Eagle phát triển trên cơ sở Eagle basic Medium (BEM). Đây là một trong những Medium cơ bản nhất và có thể áp dụng rộng rãi nhất. Đây là một trong những môi trường được sử dụng phổ biến nhất trong nuôi cấy tế bào động vật, bao gồm HeLa, BHK-21, 293, HEP-2, HT-1080, McF-7, nguyên bào sợi và tế bào hình sao sơ ​​cấp của chuột. Môi trường nuôi cấy MEM chỉ chứa 12 loại axit amin thiết yếu, glutamine và 8 loại vitamin. Nó có thành phần đơn giản và chủ yếu được sử dụng để nuôi cấy các tế bào bám dính. Sau khi sửa đổi công thức, nó cũng có thể được sử dụng để nuôi cấy các loại tế bào khác.

Thành phần của môi trường nuôi cấy MEM

L-glutamine (Glutamine)

L-glutamine (Glutamine) là một thành phần dinh dưỡng thiết yếu trong nuôi cấy tế bào, nhưng nó không ổn định trong dung dịch và sẽ tự phân hủy. Lượng L-glutamine có thể được điều chỉnh tùy ý theo nhu cầu nghiên cứu của môi trường không có L-glutamine, và việc bổ sung L-glutamine tươi hoặc chất thay thế tại thời điểm sử dụng có lợi hơn cho sự phát triển của tế bào.

L-alanyl-L-glutamine (Ala-Glu), còn được gọi là alanyl-glutamine và alanyl-glutamyl dipeptide, là một chất phụ gia nuôi cấy tế bào tiên tiến có thể thay thế trực tiếp L-glutamine trong môi trường nuôi cấy tế bào. L-Glutamine là một chất dinh dưỡng thiết yếu trong nuôi cấy tế bào, nhưng nó không ổn định trong dung dịch và sẽ, tuy nhiên, nó không ổn định trong dung dịch và tự phân hủy để tạo ra amoniac và axit pyroglutamic, trong đó amoniac có hại cho tế bào, trong khi L-alanyl-L-glutamine rất ổn định trong dung dịch nước và không tự phân hủy. Cơ chế sử dụng tế bào là trong quá trình nuôi cấy tế bào, các tế bào sẽ dần dần giải phóng một peptidase vào môi trường nuôi cấy để thủy phân L-alanyl-L-glutamyl thành L-alanine và L-glutamine, sau đó các tế bào sẽ tiếp nhận và sử dụng hai sản phẩm thủy phân này. Quá trình sử dụng L-alanyl-L-glutamyl của tế bào tương tự như chiến lược nuôi cấy bổ sung dòng chảy, ở chỗ nồng độ L-glutamine thấp liên tục được thêm vào môi trường nuôi cấy, do đó làm tăng việc sử dụng L-glutamine mà không tạo ra amoniac dư thừa, có lợi hơn cho sự phát triển của tế bào. L-alanyl-L-glutamyl có thể thay thế L-glutamine đẳng mol, phù hợp với mọi tế bào, ít cần thích ứng và có thể kéo dài thời gian nuôi cấy tế bào. Nó cũng có thể kéo dài thời gian nuôi cấy tế bào và giảm số lần truyền, giúp tiết kiệm thời gian và tiền bạc. Các tế bào được nuôi cấy trong môi trường bổ sung L-glutamine cho thấy sự giảm hoạt động chậm hơn so với các tế bào được nuôi cấy trong môi trường bổ sung L-glutamine. Khoảng thời gian trì hoãn dài hơn một chút là do thời gian cần thiết để giải phóng peptidase và tiêu hóa dipeptide.

NEAA (Axit amin không thiết yếu)

NEAA (Axit amin không thiết yếu), bao gồm 7 loại NEAA là L-alanine, axit L-glutamic, L-asparagine, axit L-aspartic, L-proline, L-serine và glycine được thêm vào môi trường MEM, có thể làm giảm tác dụng phụ của quá trình sản xuất axit amin không thiết yếu của tế bào trong quá trình nuôi cấy tế bào và thúc đẩy hiệu quả quá trình tăng sinh và chuyển hóa tế bào.

Glucose có thể được điều chỉnh theo nhu cầu nghiên cứu, thuận tiện và nhanh chóng. Môi trường loại đường cao thường được sử dụng cho các tế bào phát triển nhanh với độ bám dính thấp, tế bào u tủy của tế bào lai, tế bào vô tính, tế bào chuyển gen DNA, các tế bào vật chủ virus nguyên phát khác nhau, nuôi cấy tế bào đơn lẻ và sản xuất vắc-xin, chẳng hạn như sử dụng tế bào CHO để biểu hiện EPO và sản xuất vắc-xin viêm gan B. Môi trường ít đường phù hợp hơn cho việc nuôi cấy các tế bào chuyển hóa chậm hơn, phụ thuộc vào độ bám dính.

HEPES là một đệm sinh học tuyệt vời, không có tác dụng độc hại đối với tế bào. Môi trường có HEPES có thể duy trì phạm vi pH không đổi trong thời gian dài hơn, có thể ngăn ngừa hiệu quả sự phát triển của tế bào khỏi bị ảnh hưởng xấu bởi sự dao động pH lớn của môi trường nuôi cấy. Có thể sử dụng trong các lồng ấp không có CO2.

Phenol đỏ được sử dụng như một chất chỉ thị PH trong môi trường nuôi cấy để liên tục theo dõi độ pH của môi trường nuôi cấy. Phenol đỏ làm cho môi trường nuôi cấy có màu vàng ở PH thấp, màu tím ở PH cao hơn và màu đỏ ở PH 7.2~7.4, phù hợp nhất cho nuôi cấy tế bào. Tuy nhiên, phenol đỏ cũng có một số nhược điểm. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng phenol đỏ có thể bắt chước tác dụng của hormone steroid (đặc biệt là estrogen), vì vậy khi sử dụng các tế bào nhạy cảm với estrogen (như mô vú), tốt nhất là sử dụng môi trường không có phenol đỏ. Phenol đỏ có thể gây trở ngại cho việc phát hiện trong quá trình phân tích tế bào dòng chảy. Ngoài ra, sự hiện diện của phenol đỏ trong một số công thức môi trường không có huyết thanh có thể gây trở ngại cho sự cân bằng natri-kali.

Dung dịch penicillin-streptomycin

Dung dịch penicillin-streptomycin, còn được gọi phổ biến là "kháng sinh kép", là loại kháng sinh được sử dụng phổ biến nhất trong nuôi cấy in vitro để ngăn ngừa nhiễm khuẩn, trong đó penicillin can thiệp vào quá trình tổng hợp thành tế bào vi khuẩn và đặc biệt hiệu quả đối với vi khuẩn Gram dương, trong khi streptomycin ức chế quá trình tổng hợp protein của vi khuẩn bằng cách liên kết với tiểu đơn vị 30S của ribosome vi khuẩn và đặc biệt hiệu quả đối với Streptomycin liên kết với tiểu đơn vị 30S của ribosome vi khuẩn và ức chế quá trình tổng hợp protein của vi khuẩn, có hiệu quả đối với cả vi khuẩn Gram âm và Gram dương, nhưng đặc biệt hiệu quả đối với vi khuẩn Gram âm. Sự kết hợp của penicillin và streptomycin có thể ngăn ngừa hầu hết tình trạng nhiễm khuẩn.

Sản phẩm này chứa các axit amin, vitamin, muối vô cơ và nhiều thành phần khác cần thiết cho quá trình nuôi cấy tế bào đa dạng, nhưng không chứa protein, lipid hoặc bất kỳ yếu tố tăng trưởng nào, do đó sản phẩm này nên được sử dụng với huyết thanh hoặc các chất phụ gia không chứa huyết thanh.

Lưu ý

Sản phẩm này đã được lọc và khử khuẩn và phải được sử dụng cẩn thận theo quy trình vô trùng để tránh nhiễm bẩn.
Không đông lạnh-rã đông sản phẩm để duy trì hiệu quả sử dụng tốt nhất của sản phẩm.
Sản phẩm này chỉ dùng cho mục đích nghiên cứu khoa học hoặc nghiên cứu sâu hơn, không dùng để chẩn đoán hoặc điều trị.