Môi trường tối thiểu cần thiết dạng bột (MEM)

RPMI-1640 là môi trường cải tiến của McCoy's 5A và có tác dụng độc đáo so với các môi trường khác vì nó chứa chất khử glutathione và nồng độ vitamin cao. RPMI 1640 chứa biotin, vitamin B12 và PABA, không có trong MEM và DMEM của Eagle. Ngoài ra, môi trường còn chứa nồng độ rất cao các vitamin inositol và choline. Môi trường RPMI 1640 được phát hiện là phù hợp với nhiều loại tế bào động vật có vú bao gồm tế bào HeLa, tế bào jurkat, tế bào MCF-7, tế bào PC12, tế bào PBMC, tế bào hình sao và tế bào ung thư, đây là một trong những môi trường được sử dụng rộng rãi nhất. Môi trường RPMI 1640 không chứa protein, lipid hoặc yếu tố tăng trưởng. Vì vậy, nó thường yêu cầu bổ sung 10% huyết thanh bò thai nhi (FBS). RPMI 1640 sử dụng hệ thống đệm natri bicarbonate (2.0 g/L) và do đó cần môi trường có 5-10% CO2 để duy trì độ pH sinh lý. Đối với nhiều ứng dụng nuôi cấy tế bào, chúng tôi cung cấp Môi trường nuôi cấy RPMI 1640 Modified với nhiều thành phần khác nhau và Môi trường RPMI 1640 với các thành phần có thể tùy chỉnh.

Thành phần của RPMI-1640 Medium dạng bột

Môi trường bột khô RPMI-1640 này cần được bổ sung natri bicarbonate, điều chỉnh pH và lọc khi pha chế. Phương pháp pha chế chi tiết như sau:

1. Thêm 950 mL nước cất vào bình trộn càng gần với thể tích cuối cùng càng tốt.
2. Thêm môi trường khô vào nước ở nhiệt độ phòng (15°C đến 30°C) và khuấy nhẹ. Không đun nóng nước.
3. Rửa sạch bên trong gói để loại bỏ hết bột còn sót lại.
4. Thêm 29.3 mL dung dịch NaHCO75 3 g/L vào môi trường.
5. Điều chỉnh pH xuống thấp hơn 0.2 đến 0.3 đơn vị so với pH làm việc cuối cùng mong muốn bằng cách từ từ thêm và khuấy NaOH 1 N hoặc HCl 1 N. Độ pH có thể tăng từ 0.1 đến 0.3 đơn vị sau khi lọc. Độ pH làm việc được khuyến nghị là 7.1-7.4.
6. Điều chỉnh thể tích cuối cùng bằng nước cất.
7. Xử lý ngay môi trường thông qua chức năng lọc màng của bộ lọc 0.2 μm vào một thùng chứa vô trùng bằng hệ thống áp suất dương.